金標卡板GICA技術檢測動物疾病病原體細菌

　　豬鏈球菌有較強的致病性，可以引起豬腦膜炎、心內膜炎、敗血癥、肺炎甚至突然死亡。同時也可感染人，引起敗血癥、中毒性休克綜合征和腦膜炎。因為此病流行廣，發病人、豬的數量多，對公共衛生和養殖業有的威脅。鞠瑩等建立了膠體金免疫層析法用于檢測豬鏈球菌2型的方法：用膠體金標記豬鏈球菌2型多克隆抗體，制得膠體金免疫層析金標卡板試紙條。結果表明，所研制的膠體金免疫層析金標卡板試紙條的   低檢測限為100萬CFU/mL，標本處理簡單，10min即可出結果。特異性方面僅與SS1/2有交叉反應，與其它常見致病菌及鏈球菌屬中的15個群均無交叉反應。而且通過對模擬樣品的檢測，其特異性和敏感性未受到改變。
　　劉洪貴等建立了一種檢測金黃色葡萄球菌的新方法：雙抗夾心法。該方法用膠體金標記抗金黃色葡萄球菌凝集因子A重組蛋白特異性抗體，再用抗金黃色葡萄球菌IgG包被硝酸纖維素膜，制成免疫層析檢測試紙條。結果表明，敏感性為1萬CFU/mL，但與PCR方法相比低一個數量級。與大腸桿菌、鏈球菌、李氏桿菌、巴氏桿菌及芽抱桿菌均無交叉，具有較好的特異性。
　　大腸桿菌O157是產志賀毒素大腸桿菌的主要血清型。志賀毒素是大腸桿菌O157的主要毒力因子之一，有Stx1和Stx2兩種生物型，分泌Stx2的毒力較強。高成秀利用大腸桿菌BL21獲得純化的融合蛋白，并多次免疫新西蘭大白兔，獲得重組Stx2B的多克隆抗體；同時制備了大腸桿菌O157單克隆抗體。采用雙抗夾心法分別制備了Stx2試紙條和大腸桿菌試紙條。用Stx2試紙條對58株已鑒定的大腸桿菌進行檢測，與Vero細胞毒性試驗相比較，其陽性檢出符合率為50%，顯色時間為5~10min；而大腸桿菌O157試紙條的檢測結果與凝集試驗相比較，其陽性檢測符合率為87.5%，檢測靈敏度為10萬CFU/mL，顯色時間為3~5min。陽性率的批內變異系數為2.1%、批間變異系數為6.9%，這說明大腸桿菌O157金標卡板試紙條的特異性、重復性和敏感性較好。但Stx2試紙條的陽性檢測率和重復性還有待進一步提高。
　　牛結核病是由分枝桿菌引起的人獸共患的慢性消耗性傳染病，世界衛生組織推薦的檢測方法為結核菌素皮內變態反應，該檢測方法易出現假陽性，即易受到非致病性分枝桿菌的干擾?，斚蜉x等建立了牛結核膠體金免疫層析診斷方法，用兔抗牛血清蛋白和大腸埃希菌表達的牛分枝桿菌MPB70-83-ESAT-6蛋白分別作為膠體金標記抗原和檢測線上的捕獲抗原，制備了牛結核抗體檢測試紙條。結果顯示，所研制的試紙條不與牛副結核、牛巴貝斯病、口蹄疫和牛傳染性鼻氣管炎病陽性血清作用，因此具有很好的特異性。另外，金標卡板試紙條與TST的符合率為80%。